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BacilluscereusMBL13-U胶原蛋白酶的分离纯化及其降解动力学分析
日期:2021-11-29
信息摘要:
为制备新型的骨胶原蛋白酶并探讨其降解胶原蛋白的能力,通过采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶层析等分离纯化步骤,从BacilluscereusMBL13-U菌株的粗酶液中分离纯化出一种特异性降解牛骨胶原蛋白的胶原蛋白酶(bone-specific collagenase,BSC),对该酶的分子质量、底物特异性和降解能力进行了分析,并构建出其降解牛骨胶原蛋白的动力学模型。

胶原蛋白酶是特异性水解天然胶原蛋白或明胶的酶类。为制备新型的骨胶原蛋白酶并探讨其降解胶原蛋白的能力,通过采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶层析等分离纯化步骤,从BacilluscereusMBL13-U菌株的粗酶液中分离纯化出一种特异性降解牛骨胶原蛋白的胶原蛋白酶(bone-specific collagenase,BSC),对该酶的分子质量、底物特异性和降解能力进行了分析,并构建出其降解牛骨胶原蛋白的动力学模型。结果表明:分离纯化的BSC比活力为5.57×103U/mg,纯化倍数达到42.85倍,分子质量约为52.0 kDa。经特异性分析该酶为骨胶原蛋白酶,且有显著的水解I型胶原蛋白的能力。其水解能力好于其他常用的蛋白酶。构建出该酶降解牛骨胶原蛋白的动力学模型为:降解速率R=(583.813 6E0+1.296 7S0)exp(-0.119 0DH)
我国的养殖业发展迅速,如何有效利用畜禽屠宰后的副产物,成为近年来的研究热点。利用酶技术对我国来源广泛的畜禽骨资源进行深加工,既解决了大量畜禽骨骼的浪费问题,又带来了**的经济效益[1-2]。胶原蛋白酶是通过胶原的解螺旋作用降解胶原蛋白却不作用于其他蛋白底物的酶类。胶原蛋白肽是胶原蛋白经降解后所得的小肽混合物。从来源上,胶原蛋白酶可分为微生物胶原蛋白酶和动物胶原蛋白酶,而微生物源的胶原蛋白酶因其高酶活等优点被广泛采用,如FERREIRA等[5]通过曲霉菌生产胶原酶,并对所产酶分离纯化及酶学特性研究。NAGANO等[6]从枯草芽孢杆菌培养基的上清液中分离胶原酶,研究酶纯化后的特异性。ABFALTER等[7]从蜡状芽孢杆菌ATCC 14579中克隆出胶原酶ColA基因并对其表达机制进行研究。在工业开发中胶原蛋白酶可应用于胶原蛋白分级降解获得胶原多肽,而由于骨骼中主要的蛋白质为胶原蛋白,因此选用专用的胶原蛋白酶进行酶解则具有很高的研究价值。
蛋白的降解过程是集复杂和多样于一体的过程[8-10],不同的蛋白酶和降解条件都会对蛋白质的降解产生很大的影响,很难在生产应用上掌握和调控蛋白的降解过程。因此,从反应机理出发,推导描述蛋白质降解过程规律的动力学关系,得出动力学参数,建立符合实验数据的实验模型,对于蛋白质降解过程的深入理解有重要意义[11-12]。本研究以课题组筛选的菌种BacilluscereusMBL13-U为出发菌种,将其粗酶液依次采用多种分离纯化步骤,纯化出一种特异降解牛骨胶原蛋白的酶,并对其特性进行了相关分析。同时,参照相关研究[13-15],以米氏方程为基础,针对骨胶原蛋白酶(bone-specifi collagenase,BSC)降解牛骨胶原蛋白的动力学进行探讨,从而构建出降解牛骨胶原蛋白的动力学模型。该项研究为新型胶原蛋白酶源的开发及其未来开发应用奠定了科学理论意义。
文章转自:https://www.cnenzyme.com/tech/show-528.html
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